O seriado chegou ao Brasil em março de 1963, sendo mostrado pela extinta TV Tupi. Após sair da TV Tupi no final da década de 1960, o programa foi adquirido pela TV Bandeirantes, e anos mais tarde foi exibida pela TV Gazeta, que mostrou apenas as duas primeiras temporadas de Rota 66. Já nos anos 90, a série voltou a programação brasileira pelo canal Sony.

Por aqui o seriado recebeu a dublagem da A.I.C. – São Paulo, que curiosamente mudou o sobrenome do personagem Tod de Stiles para Stanley. Amilton Fernandes e Osmiro Campos fizeram as vozes da dupla de protagonistas.

A direção de dublagem era responsabilidade de Wolner Camargo que desempenho a função até o vigésimo episódio, aproximadamente, quando seu filho Émerson Camargo, então tradutor da dublagem da série, assumiu a função.